CRISPR, et barn af den moderne biologi, vokser ved leaps og bounds. Den er vokset fra en fremmed del af den bakterielle immunsystemet til at være et redskab til at behandle genetiske sygdomme, forbedring af mikro-organismer, forbedring af fødevareproduktion og skadedyrsbekæmpelse. Siden da har forskere vedtaget dette værktøj til at redigere de gener, og begyndte at bruge det i pattedyrceller, CRISPR var barrikaderede i cellemembranerne. Teknologien til redigering af gener, der virker hans magi, der skæres i stykker af defekte DNA og indsætte sund erstatning. Alle disse trin, ved at klippe og klistre segmenter fandt sted i levende celler. Stadig.
I sidste uge i tidsskriftet CRISPR Tidende en undersøgelse, der blev offentliggjort endelig befriet TIRSDAG fra sin celle i fængslet. Udskiftning af den komponent, “Treasury” CRISPR alternativ version, forskere fra Institut for redigering af gener i Delaware har udviklet et nyt system, der hedder CRISPR, som kan skære frit svævende DNA in vitro.
At bistå i at udføre reaktionen hætteglas med den celle, uddrag: et sæt af enzymer og andre biomolekyler til arbejde CRISPR.
Hvad er gennembrud?
Diagnostiske mirakel
For at få CRISPR til at arbejde uden for buret, kan det synes mærkeligt, akademisk opgave, men i at udvikle systemet, forskere holdt i tankerne to specifikke mål.
For det første, dette værktøj giver forskerne mulighed for samtidig at lave flere genetiske knockouts, mens tidligere versioner var begrænset til redigering af DNA i et enkelt gen. Dette er gode nyheder for personlig medicin, især til diagnose af kræft, og mange kræftformer har mutationer i flere steder, der svarer til en forskellig behandling i forskellige måder.
Før behandling, læger sender ofte en biopsi prøve af tumor for DNA-sekventering. Dette vigtige trin hjælper dig med at identificere mange af de genetiske mutationer, der fører til vækst eller spredning af et bestemt tumor.
Ved hjælp af det nye værktøj, forskerne præcist kan simulere disse mutationer i syntetisk DNA-fragmenter in vitro, hovedsagelig genskabelse af en kræft i en sikker, kontrolleret miljø. Dette giver forskere adgang til den biologiske veje påvirket af de mutationer, og kan medvirke i skabelsen af personlig behandling strategier.
Endnu mere imponerende, denne form for diagnostik, der kan afholdes på blot én dag. “Det er især vigtigt for den diagnose, der er relateret til kræft, når det er et spørgsmål af minutter eller timer,” siger undersøgelsen forfatter Dr. Eric Kmiec.
Kmiec ikke den første, så CRISPR diagnostiske værktøj. Der ud over genterapi, CRISPR, kan vise sig stærkt i den diagnose, var det klart for længe siden. Tidligere skrev vi, at to hold af forskere, der præsenteres testen DETECTR og SHERLOCK, der effektivt at jage for virus, zika, dengue eller farlige stammer af HPV, der fører til livmoderhalskræft.
Kmiec hævder, at hans opfindelse kræver et “betydeligt” mindre tid til at bekræfte tilstedeværelsen af kræft uden for kroppen, primært på grund af evnen til at foretage flere versioner på samme tid.
At realisere potentialet og rentabiliteten af CRISPR som et diagnostisk værktøj, Kmiec og hans kolleger er allerede på udkig efter en kommerciel partner til at udvikle den teknologi, “CRISPR-on-a-chip” til diagnosticering af kræft.
Hvis du lægge den umiddelbare applikationer, holdet håber også at udvide det terapeutiske potentiale af CRISPR til en meget bredere vifte af menneskelige sygdomme. Eksisterende CRISPR værktøjer er ideel til behandling af sygdomme forårsaget af mutationer i et enkelt gen, såsom seglcelleanæmi eller huntingtons sygdom. Men da arbejdet Cieca, der tager sigte på flere gener samtidigt, kan det potentielt føre til behandling af sygdomme med mere komplekse genetiske oprindelse flere mutationer i flere forskellige gener — hvis disse mutationer er velkarakteriserede.
Gennem linsen
Isolering CRISPR in vitro har en anden fordel: det giver forskerne mulighed for klart at forstå, hvad der sker før, under og efter redigering. Og fordi kliniske forsøg CRISPR aktivt fremmes, det er vigtigt at forstå, hvordan til at gøre teknologi mere præcis og effektiv.
CRISPR har allerede nået en masse, men den ubekvemme sandhed er, at forskerne stadig ikke helt sikker på, hvordan værktøjet fungerer, bliver i buret. Hvordan værktøjer til at kommunikere med andre biobrændstoffer i et bur? Han skærer kun mål-DNA eller sin saks kan gå amok i visse tilfælde?
“Når du arbejder med CRISPR i den celle, du arbejder i en sort boks, der ikke kan overholde de mekanismer, der gør disse fantastiske ting,” siger Kmiec. “Kan du se de resultater, nemlig i form af ændringer i gener, men hvordan kom du til at — ikke nødvendigvis, og det er vigtigt for at sikre sikkerheden af CRISPR til at behandle patienter.”
Begrænsning CRISPR række biokemiske reaktioner i et reagensglas, og forskere foreslår en måde at betragte den komplekse molekylære interaktioner, der finder sted under snittet af DNA, gen-erstatning, og andre processer. Tilgang udelukkende reduktionistisk. Men det giver cell-free system til at arbejde som Arduino, at eksperimentere med de muligheder for CRISPR og skabe nye biologiske værktøjer, som er svære at forestille sig.
Substitution
Institut redigere gener i næsten straks konfronteret med det problem, at udvikle cell-free system.
Problemet barn var Cas9, sakse protein, som anvendes i CRISPR systemer. Når forskere blandet sit DNA med plasmid — cirkulære DNA, som forskerne ofte brug for gen levering til celler in vitro, protein var helt inaktive.
Det viste sig, at Cas9, for at blive erstattet af Cpf1 (aka Cas12a), et andet medlem af den voksende bibliotek af Cas-proteiner. Oprindeligt åbnet i 2015, Cpf1 har allerede vist sig at være nyttige i at skabe transgene mus og justering af den mutation, der forårsager muskelsvind. For ikke så længe siden Cpf1, der anvendes i systemet DETECTR til at bekæmpe virus, der forårsager kræft. Dette protein lys fremtid: virksomheden Editas, redigering af gener, der har licens det til yderligere udvikling i 2016.
Udveksling arbejdet. Den CRISPR system-Cpf1 trådte i kraft i et reagensglas. I flere forsøg har forskere bevist, at der er gratis fra celler, systemet kan kopiere de fleste af de ændringer, der CRISPR gør inde i buret. Det er bemærkelsesværdigt, at saksen virkede lidt som Cas9. Når Cas9 gør et snit, og det efterlader Everglade “cut ender” på den klippe DNA. Dette komplicerer idriftsættelse af nye stykker af genetisk materiale. Fordi den ender, er meget glat, instrumentering kræver præcis tilpasning af udskiftning blokere DNA, så det gled på plads.
Omvendt, Cpf1 blade “sticky” ender. Disse stykker af DNA, der fungerer som skuldre, som om tape støtte til at fastholde en erstatning DNA. Det er måske derfor, Cpf1 virker bedre end Cas9, in vitro, men det mangler at blive testet.
Systemet Kieza — blot ét eksempel på, hvor langt CRISPR. Som CRISPR fortsætter med at vokse, dets udviklere lover os en masse, vi endnu ikke kan forestille sig.
CRISPR-on-a-chip kan tjene som et redskab for kræft diagnose
Ilya Hel